Ảnh hưởng của cao quả nhàu (morinda citrifolia) lên số lượng lympho bào tcd3, lympho bào bcd19 và khả năng tiết cytokin il2, tnf trên chuột nhắt trắng bị gây suy giảm miễn dịch bằng cyclophosphamid

Cây nhàu (Morinda citrifolia L. Rubiaceae), một trong những dược liệu được nhân dân sử dụng  lâu  đời  với  mục  đích   nâng  cao  sức  đề kháng của cơ thể. Trong các nghiên cứu trước của  chúng  tôi,  trên  chuột  nhắt  trắng  cao  quả nhàu  liều  6  g/kg trên  cả  hai  mô  hình  gây  suy giảm  miễn  dịch  bằng  tia xạ  và  CY đều  có  tác dụng  làm  tăng  cường  khả  năng  hồi  phục  các tổn  thương  trên  hệ  miễn  dịch  thông  qua  phục hồi số lượng tế bào, chức năng của các lympho bào B (Tăng tỷ lệ tạo hoa hồng mẫn cảm và quầng dung huyết), chức năng của các lympho bào T [1], tăng số lượng dưới nhóm của các lympho  bào T CD4, CD8  và sự chuyển dạng các lympho   bào   trong  môi   trường   nuôi   cấy   trên chuột  nhắt  trắng  bị  gây  suy  giảm  miễn  dịch bằng cyclophosphamid [2].
Đặc biệt gần đây nhiều nhà khoa học trên thế giới đã nghiên cứu về quả của cây nhàu trồng ở
Hawaii  và bước đầu đưa ra nhiều kết quả nghiên cứu khả quan  về tác dụng chống ung thư, chống oxyhóa và kích thích  miễn dịch [7, 8, 9]. Vì vậy, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài này nhằm mục tiêu: Đánh giá sâu hơn về cơ chế tác dụng
trên miễn dịch của quả nhàu: đánh giá số lượng lympho bào TCD3, BCD19, định lượng nồng độ IL2 và TNF.
I.    ĐỐI  TƯỢNG  VÀ  PHƯƠNG   PHÁP NGHIÊN CỨU
1. Chất liệu và đối tượng nghiên cứu Thuốc:
–    Cao  quả  nhàu  được  chiết  xuất  trong  hỗn hợp dung môi cồn ethylic  và nước, được cô đặc đến tỉ lệ 1:5 (1 gam cao từ 5 gam dược liệu khô) do Công  ty Nacatifoods  cung cấp. Khi sử  dụng, cao thuốc được pha  loãng trong  dung  môi nước thành các nồng độ khác nhau.
–    Levamisol  dạng  bột  chuẩn  đạt  hàm  lượng 99%  do  viện  Kiểm  nghiệm  thuốc  Trung  Ương cung cấp.
*    Đối  tượng  nghiên  cứu:  Chuột  nhắt  trắng chủng  Swiss,  cả  hai  giống,  khoẻ  mạnh,  cân nặng  20  – 22g  của  viện  Vệ  sinh  dịch  tễ  Trung Ương. Súc  vật được  nuôi dưỡng  trong điều  kiện chuẩn phòng thí nghiệm của bộ môn Dược lý.
2. Phương pháp nghiên cứu
Chuột   nhắt   trắng   được   chia   ngẫu   nhiên thành 4 lô:
Lô1:  Chứng  sinh  học:  không  tác  động  gì, hàng ngày uống nước cất 0,2ml/10g chuột.
Lô2: Mô hình:  tiêm CY màng bụng liều 200 mg/kg + uống nước cất hàng ngày 0,2ml/10g.
Lô3:  Chứng  dương:tiêm  CY màng  bụng  liều
200   mg/kg  +  uống  levamisol   hàng  ngày  liều 100mg/kg.
Lô  4:  Thuốc  thử:  tiêm  CY màng  bụng  liều 200  mg/kg + uống cao quả nhàu hàng ngày liều 6 g/kg.
Các lô chuột sau khi được tiêm CY và được uống   thuốc   hoặc   nước  cất  liên   tục   trong  5 ngày,  ngày  thứ  6  giết  chuột,  lấy  máu  động mạnh  cảnh, bóc  tách  lấy tổ  chức  lách để  lầm
các xét nghiệm.
*    Các thông số nghiên cứu:
–    Xác  định  số  lượng  lympho  bào  TCD3,  BCD19 bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang.
–    Định  lượng  nồng  độ  IL2  và  TNF  bằng phương   pháp   ELISA,   chế   phẩm   của   Hãng Invitrogen Caltag, CA 94010, Mỹ.
*    Tách tế bào lách từ tổ chức lách, nuôi cấy tế bào lách và định lượng cytokine:
Phá  hồng  cầu  khỏi  hỗn  dịch  tế  bào  lách bằng dung dịch NH4Cl  0,83%. Rửa ba lần hỗn dịch tế bào lách bằng Hanks.  Đếm tế bào lách. Nuôi cấy tế bào 1 x 106 tế bào/ 1ml môi trường nuôi cấy. Môi trường nuôi cấy là F2 + 10%  FCS (Fetal Calf Sera). Thêm vào môi trường nuôi cấy đó có tế bào 3 µl PHA/1ml môi trường nuôi cấy. Ủ ở 37oC trong 48h,  ly tâm lấy dịch nổi.
*    Đếm tế bào TCD3, BCD19   bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang:
Phương  pháp  miễn  dịch  huỳnh  quang  trực tiếp với các chế phẩm của Hóng Invitrogen Cal- tag, CA 94010 (Mỹ) ở tế bào lách phân lập.
*    Số  liệu  được  trình  bày  X ± SE, được  xử  lý thống kê theo t – test Student và test trước – sau.
Mục tiêu: Nghiên cứu ảnh hưởng của cao mềm quả nhàu lên số lượng lympho bào T CD3, B CD19
trong lách và khả năng tiết cytokine của các tế bào lympho nuôi cấy. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: cao quả nhàu tỉ lệ 1:5 (1 g cao chứa 5 gam dược liệu) cho chuột nhắt uống liều 6g/kg thể trọng, liên tục 5 ngày sau khi bị tiêm màng bụng CY liều 200 mg/kg. Lấy tế bào lympho lách để nuôi cấy trong 48 tiếng, đánh giá số lượng lympho bào TCD3, BCD19  bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang, định lượng nồng độ IL2 và TNFỏ bằng phương pháp ELISA. Kết quả: cao quả nhàu làm tăng số lượng lympho bào TCD3, BCD19 trong lách, tăng nồng độ IL2 và TNF của các tế bào lỵmho lách nuôi cấy. Kết luận: cao quả nhàu liều 6g/kg có tác dụng kích thích miễn dịch đặc hiệu thông qua làm tăng số lượng lympho bào TCD3, BCD19 và khả năng tiết các cytokin trên chuột nhắt trắng bị gây suy giảm miễn dịch bằng CY