BÁN ĐỊNH LƯỢNG HCV-RNA BẰNG KỸ THUẬT PHA LOÃNG
BÁN ĐỊNH LƯỢNG HCV-RNA BẰNG KỸ THUẬT PHA LOÃNG
Đỗ Thị Thanh Thủy
TÓM TẮT :
HCV được xem là nguyên nhân chính gây viêm gan không A không B. RT-PCR phát hiện HCV-RNA trong huyết thanh là một dấu ấn khẳng định tình trạng nhiễm virus. Ngoài ra, số lượng HCV-RNA có thể tương quan với sự tiến triển của bệnh nên nó cũng chính là một dấu ấn có giá trị tiên lượng trong điều trị. Do đó kỹ thuật định lượng HCV-RNA có giá trị quan trọng trong việc quyết định cách thức điều trị cũng như theo dõi điều trị. Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng kỹ thuật bán định lượng HCV-RNA bằng phương pháp pha loãng Vật liệu và phương pháp: * Vật liệu: 5 mẫu huyết thanh bệnh nhân có kết quả định lượng HCV RNA bằng kỹ thuật bDNA 340 (System 340 – bDNA analyser – Version 3) assay) (Trung tâm Medic). * Phương pháp: Ly trích các mẫu huyết thanh đã có số lượng virus dựa vào bDNA 340, theo phương pháp Chomozynski và Sacchi, rồi tiến hành theo hai cách sau 1) pha loãng huyết thanh vừa được ly trích theo hệ số 10, và tiến hành RT-PCR; 2) tiến hành giai đoạn RT trước rồi mới pha loãng sản phẩm RT theo hệ số 10 trước khi tiến hành nested PCR. So sánh hai cách trên. Kết quả: Chạy điện di ghi nhận các kết quả định lượng dựa trên số lượng bản sao virus có được từ kết quả của bDNA. So sánh hai cách bán định lượng, nhận thấy cách thứ hai là tiến hành ly trích, chạy RT, pha loãng sản phẩm RT trước khi thực hiện PCR cho kết quả tương tự cách thứ 1 nhưng tiết kiệm được nhiều hóa chất và thời gian. Kết luận: Bán định lượng RT-PCR dựa vào phương pháp pha loãng giúp biết được nồng độ của HCV-RNA có trong huyết thanh bệnh nhân-giúp ích cho điều trị.
Hy vọng sẽ giúp ích cho các bạn, cũng như mở ra con đường nghiên cứu, tiếp cận được luồng thông tin hữu ích và chính xác nhất