Bước đầu nghiên cứu tác dụng của Polyphenol Chè xanh (Camellia sinensis) trên một số dòng tế bào ung thư nuôi cấy

Nhiều hợp chất thiên nhiên có khả năng ngăn ngừa sự hình thành và phát triển khối u. Do có nguồn gốc thiên nhiên, các chất này không có độc tính hoặc độc tính rất thấp, có thể là nguồn của thức ăn và nước uống hàng ngày. Hàng nghìn năm nay, chè xanh là nước uống phổ biến của các dân tộc ở châu Á, trong đó có Việt Nam. Thành phần hóa học chủ yếu của chè xanh là các hợp chất polyphenol, gọi là các catechin [8]. Nghiên cứu in vitro và in vivo của một số nhà khoa học trên thế giới đã chứng minh EGCG có tác dụng ngăn cản sự phát triển của khối u, chống lại quá trình sao chép, chống sự tân sinh mạch máu, gây quá trình apoptosis tế bào [6]… Ở Việt Nam chưa có công bố nào về tác dụng của polyphenol chè cũng như tác dụng của các catechin chè xanh đối với những dòng tế bào ung thư ở người. Đề tài được thực hiện nhằm mục tiêu:

Nghiên cứu tác dụng in vitro của bột polyphe- nol và EGCG chè xanh trên một số dòng tế bào ung thư của người (ung thư phổi, ung thư gan).

II. ĐỐI   TƯỢNG   VÀ   PHƯƠNG   PHÁP NGHIÊN CỨU

1. Chất liệu nghiên cứu

Bột polyphenol chè xanh: Chiết xuất từ lá chè theo qui trình của Đặng Ngọc Dung và cộng sự [1]. EGCG chè xanh: Phân đoạn từ bột polyphe- nol chè xanh theo qui trình của Nguyễn Mạnh Cường và cộng sự (viện Hoá học – Trung tâm KHTN quốc gia).

2. Đối tượng

Nghiên cứu được tiến hành trên một số dòng tế bào ung thư của người:

LU-1 (Human Lung Carcinoma): Tế bào ung thư phổi.

Hep-G2 (Hepatocellular Carcinoma): Tế bào ung thư gan.

3. Phương pháp

Là nghiên cứu thực nghiệm in vitro.

Mô hình nghiên cứu

– Mẫu  thử  nghiệm:  Bột  polyphenol   hoặc EGCG chè xanh trong DMSO 10% với các nồng độ tăng dần.

– Mẫu chứng âm: DMSO 10%.

Tế bào của các dòng được xử lý bằng Trypsin

– EDTA, hòa dung dịch huyền phù tế bào bằng môi trường nuôi cấy sạch, tế bào có nồng độ 3 x 104 tế bào/ml.

Mô hình đánh giá  khả năng ức chế sự phát triển của các dòng tế bào ung thư

Cho vào mỗi giếng của phiến 96 giếng các thể tích lần lượt là: 10μl mẫu thử nghiệm + 190μl dung dịch huyền phù tế bào trong môi trường nuôi cấy. Xác định lượng tế bào tại thời điểm bắt đầu thí nghiệm bằng cách nhuộm tế bào có trong 200 μl / giếng dung dịch huyền phù tế bào. Phiến nuôi cấy được ủ trong tủ nuôi cấy tế bào 5% CO2, sau 3 ngày kết thúc thí nghiệm. Các thí nghiệm được lặp lại 3 lần.

  Mô hình thí nghiệm xác định hoạt độ enzym caspase-3

Cho vào các ống ly tâm 12 ml lần lượt: 100 μl mẫu thử nghiệm +1900 μl dung dịch huyền phù tế bào trong môi trường nuôi cấy. Ống nuôi cấy được ủ trong tủ nuôi cấy tế bào 5% CO2, sau 3 ngày kết thúc thí nghiệm. Các thí nghiệm được lặp lại 3 lần