Bước đầu thử nghiệm thích nghi chủng sản xuất vaccine dại vnukovo – 32 trên tế bào vero

Bệnh dại là một vấn đề y tế cộng đồng khá nghiêm trọng của các nước đang phát triển trong đó có Việt Nam. Tỷ lệ tử vong gần như là 100%, tuy nhiên bệnh có thể phòng và điều trị dự phòng bằng vaccine, phối hợp vaccine với huyết thanh kháng dại. Xu hướng hiện nay thế giới sử dụng vaccine sản xuất trên tế bào Vero vì tính hiệu quả bảo vệ và an toàn của vaccine này. Hiện nay chúng tôi có chủng giống Vnukovo – 32 là chủng sản xuất vaccine dại đã được thích nghi trên tế bào tiên phát thận chuột đất vàng. Khởi đầu cho việc nghiên cứu sản xuất vaccine dại trên tế bào Vero chúng tôi thử nghiệm thích nghi chủng sản xuất vaccine dại Vnukovo – 32 trên dòng tế bào này với mục tiêu:
Xác định khả năng thích nghi chủng sản xuất vaccine dại Vnukovo – 32 trên tế bào Vero.
I.    VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
1.    Đối tượng, vật liệu nghiên cứu
Chủng sản xuất vaccine dại tế bào thận chuột đất vàng tiên phát Vnukovo – 32 (viện Bại liệt và
viêm não Mosco, Nga cung cấp, nhân giống tại viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương);
Tế bào Vero (ECACC – WHO); tế bào CER (đại học y Oita, Nhật bản); Môi trường, chai nhựa nuôi cấy tế bào (Gibco, Nunc).
Kháng thể đơn dòng kháng nucleoprotein của virut  dại  gắn  huỳnh  quang  (anti  N  –  FITC), (biorad); kháng thể kháng dại (Pasteur Merieux);
2.    Phương pháp nghiên cứu
    Xác định khả năng xâm nhập và  nhân lên của virut dại Vnukovo – 32 trên tế bào Vero
Gây nhiễm virut dại Vnukovo – 32 đời 33 trên tế bào Vero 1 lớp và gây nhiễm vào hỗn dịch tế bào. Xác định sự xâm nhập, khả năng nhân lên trong tế bào Vero của chủng Vnukovbo – 32 bằng các kỹ thuật: miễn dịch huỳnh quang sử dụng kháng thể đơn dòng kháng N – FITC; kỹ thuật hiển vi điện tử nhuộm âm bản, lát cắt mỏng; kỹ thuật chuẩn độ hiệu giá virut trên tế bào.
    Xác định nồng độ gây nhiễm tối ưu của chủng Vnukovo – 32 trên tế bào Vero
Gây nhiễm chủng Vnukovo – 32 với các nồng độ gây nhiễm (MOI) khác nhau 0,01 MOI; 0,05

Nghiên cứu sản xuất vaccine dại trên nuôi cấy tế bào trong nước là rất cần thiết. Mục tiêu: xác định khả năng thích nghi chủng sản xuất vaccine dại Vnukovo – 32 trên tế bào Vero. Phương pháp nghiên cứu: nuôi cấy chủng Vnukovo – 32 trên tế bào Vero với các nồng độ gây nhiễm (MOI), điều kiện nuôi cấy và thời gian thu hoạch virut khác nhau để xác định khả năng và điều kiện tối ưu cho sự nhân lên của virut trên tế bào Vero. Kết quả: điều kiện nuôi cấy tối ưu của chủng Vnukovo – 32 trên tế bào Vero với MOI là 0,3, pH 7,4 và nhiệt độ 370C. Hiệu giá cao nhất đạt 103,4FFU/ml. Thời gian gặt virut thích hợp nhất cho việc thích nghi chủng là 12 – 13 ngày sau khi gây nhiễm. Kết luận: chủng Vnukovo – 32 có khả năng xâm nhập và nhân lên trên tế bào Vero