ĐỊNH LƯỢNG DOXORUBICIN TRONG HUYẾT TƯƠNG CHUỘT BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

ĐỊNH LƯỢNG DOXORUBICIN TRONG HUYẾT TƯƠNG CHUỘT BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO
Bùi Bá Minh*
TÓM TẮT
Mục tiêu:xây dựng và thẩm  định phương pháp  định lượng doxorubicin (DOX) trong huyết tương chuột, ứng dụng trong đánh giá sinh khảdụng, tương đương sinh học của các chếphẩm chứa DOX trên thực nghiệm. Phương pháp:  xây dựng và thẩm định phương pháp  định lượng DOX trong huyết  tương chuột  bằng sắc ký lỏng  hiệu năng cao (HPLC) theo hướng dẫn của FDA. Kết quả:  đã xây dựng được quy trình định lượng DOX bằng HPLC với các  điều kiện sau: xử lý  mẫu  bằng  tủa  protein  với  acetonitril;  cột  Gemini  C18;  5  µm,  250  x  4  mm;  pha  động: acetonitril  –  amoni  nitrat  0,25  g/l  trong  nước  với  tỷ lệ 30:70  (v/v);  tốc  độ dòng  1,0  ml/phút; detector:  PDA  ở 232  nm;  thể tích  tiêm  mẫu:  10  µl;  thời  gian  chạy:  10  phút;  nội  chuẩn  là daunorubicin 8 µg/l. Phương pháp có  độ  đặc hiệu, chọn lọc tốt, thời gian lưu của DOX trung bình 3,5 phút, tách biệt hơn daunorubicin với thời gian lưu trung bình 5,7 phút. Mẫu trắng có đáp ứng nhỏhơn 5% so với mẫu chuẩn và nội chuẩn. Độlặp lại tốt với độlệch chuẩn tương đối (RSD) trong ngày từ2,1 – 3,8 % và khác ngày từ3,62 – 4,68%.  Độ  đúng  đạt 91,7 – 98,4% với khoảng nồng  độtừ1 – 100 µg/l.  Độtuyến tính từ1 – 100 µg/l với R2là 0,9995. Giới hạn  định l ượng dưới 1 µg/l. Phương pháp xửlý mẫu có hiệu suất chiết cao (94,2 – 98,8%) với RSD < 4%. Mẫu huyết tương  ổn  định sau 3 chu kỳ  đông – rã và trong quá trình xửlý mẫu.  Kết luận:quy trình có thểáp dụng được để định lượng DOX trong huyết tương chuột.