Giá trị của kỹ thuật pcr khuyếch đại vùng gen d1/d2 trong chẩn đoán nhanh viêm loét giác mạc do nấm

Viêm loét giác mạc do nấm là một bệnh lý nặng nề ở mắt, có thể dẫn đến sẹo giác mạc và mù lòa. Chẩn đoán nhanh và chính xác căn nguyên nấm có ý nghĩa rất lớn trong điều trị. Mục tiêu:đánh giá giá trị của kỹ thuật PCR khuyếch đại vùng gen D1/D2 phát hiện căn nguyên nấm gây viêm loét giác mạc. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu:10 chủng nấm đã biết, 4 chủng vi khuẩn, 20 bệnh phẩm chất nạo giác mạc của bệnh nhân nghi ngờ nấm giác mạc, và 2 bệnh phẩm của bệnh nhân viêm loét  giác mạc do vi khuẩn được sử dụng trong nghiên cứu này. Kỹ thuật nhuộm soi, nuôi cấy phân lập nấm và PCR với cặp mồi đặc hiệu cho vùng D1/D2 của gen mã hóa cho 28S rRNA của các chủng nấm được áp dụng. Kết quả:PCR cho kết quả (+) đối với các chủng nấm được thử nghiệm và tất cả 20 bệnh phẩm nghi ngờ nấm giác mạc được phát hiện có nấm bằng phương pháp khác. PCR (-) trong thử nghiệm với các chủng vi khuẩn và bệnh phẩm chứa vi khuẩn. Kết luận:PCR là phương pháp chẩn đoán nhanh và hiệu quả các căn nguyên nấm gây viêm loét giác mạc.

Viêm  loét  giác  mạc  nhiễm  trùng  là  bệnh  lý hàng  đầu  gây  mù  lòa  trong số  các  bệnh  lý  giác mạc. Căn nguyên gây viêm loét giác mạc rất đa dạng, có thể do vi khuẩn, nấm, virus hoặc có thể kết  hợp  của  các  căn  nguyên  này  [8].  Thực  tế, trong  vài  thập  kỷ  gần  đây,  tỷ  lệ  viêm  loét giác mạc do nấm gia tăng một cách đáng quan ngại,chiếm tới 16 – 37% các trường hợp viêm loét giác mạc  [7].  Chẩn  đoán  được  sớm  loại  căn  nguyên gây  viêm  loét  giác  mạc  rất có  ý  nghĩa  cho  việc bắt đầu ngay quá trình điều trị tấn công đặc hiệu, giúp  chữa  khỏi  hoặc  giảm  thiểu  tối  đa  sự  hình thành sẹo giác mạc [2]. Kỹ thuật PCR chẩn đoán căn  nguyên  nấm  viêm  loét  giác  mạc  có  tính  ưu việt  hơn  nhiều  so  với  phương  pháp  chẩn  đoán kinh điển bằng nhuộm soi và nuôi cấy [4]. Trong nghiên cứu trước, chúng tôi đã áp dụng kỹ  thuật semi – nested PCR khuyếch đại đoạn gen ITS để phát  hiện  nấm  trong  bệnh  phẩm  chất  nạo  giácmạc  [1].  Tuy  vậy,  khi  áp  dụng  cho  chẩn  đoán thường  qui  các  bệnh  phẩm  lâm  sàng,  kỹ  thuậtnested PCR có những nhược điểm đáng phải cân nhắc. Đó là thời gian chẩn đoán phải kéo dài do thực  hiện  hai  phản  ứng  PCR  và  nguy  cơ  dễ  bị nhiễm  DNA  khi  thường  xuyên  phải  thao  tác  với các  sản  phẩm  PCR  đã  được  khuyếch  đại  [3,  9].
Với mong muốn áp dụng được kỹ thuật PCR đơn để chẩn đoán hiệu quả các mẫu bệnh phẩm lâm sàng, vùng gen D1/D2 nằm ở gần đầu 5’ của gen mã hóa cho tiểu phần 28S của rRNA đã được lựa chọn làm gen đích. Chúng tôi tiến hành cứu với
mục tiêu:Đánh  giá  giá  trị  của  kỹ  thuật  PCR  khuyếch đại vùng gen D1/D2 phát hiện căn nguyên nấm gây viêm loét giác mạc.