Kết quả nghiên cứu quy trình giảm khối lượng hồng cầu máu cuống rốn sử dụng cho bảo quản dài ngày tế bào gốc tạo máu

Giảm hồng cầu là bước rất cần thiết góp phần nâng cao chất lượng bảo quản dài ngày tế bào gốc máu cuống rốn. Giảm HC sẽ làm giảm thể tích máu bảo quản, giảm chất bảo quản, giảm HST tự do khi làm tan đông, do đó tế bào gốc được bảo vệ tốt hơn.

Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng phương pháp ly tâm để loại bớt HC, với mục tiêu loại HC tối đa nhưng BC (bạch cầu) mất tối thiểu. Tới nay có nhiều phương pháp đã áp dụng để loại HC máu cuống rốn như dùng ficoll, gelatin, HES [3, 4, 5].

Nhược điểm của các phương pháp này là phải thêm bước loại bỏ hoá chất trước bảo quản hoặc trước khi dùng phương pháp ly tâm khắc phục được  nhược  điểm  này.  Một  số  tác  giả  dùng phương pháp ly tâm, nhưng chỉ cho người châu Âu, chưa có tài liệu cho người Việt Nam. Vì vậy nghiên cứu hiện nay nhằm mục tiêu:

Xây dựng chương trình ly tâm làm giảm hồng cầu MCR thích hợp với người Việt Nam đạt hiệu quả cao.

I. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU

1. Máu cuống rốn (MCR)

Các mẫu máu cuống rốn được thu gom vào túi chất dẻo có chứa chất chống đông CPD – A1. Chúng tôi chỉ sử dụng đơn vị máu rốn đạt > 90ml không kể chất chống đông cho nghiên cứu này.

2. Phương pháp

Tìm chương trình ly tâm thích hợp

Để có chương trình ly tâm tối ưu với yêu cầu: HC mất tối đa, tế bào CD34  mất tối thiểu, chúng tôi đã thăm dò để tìm thời gian ly tâm và lực ly tâm thích hợp bằng cách:

* Lô 1: Cố định thời gian ly tâm (5) và  thay đổi lực ly tâm từ 100 – 600g.

* Lô 2: Cố định lực ly tâm (500g), thay đổi thời gian từ 3 đến 7.

Tập trung tế bào có nhân (bạch cầu) làm giảm thể tích bảo quản

Huyết tương giàu bạch cầu nhận được sau ly

tâm bước 1, tiếp tục ly tâm bước 2 với lực ly tâm cao hơn và thời gian dài hơn (1000g/10phút) thu 2 sản phẩm: Tế bào có nhân (bạch cầu) và huyết tương bạch cầu.

Ứng dụng qui trình mới loại HC MCR

Bằng chương trình đã chọn ứng dụng loại HC của 20 mẫu MCR đã được thu gom đúng tiêu chuẩn qui định.

Kết quả được xử lý bằng toán thống kê y học

Ở mỗi điểm nghiên cứu (lực ly tâm hoặc thời gian) đều được kiểm tra 3 chỉ số sau đây: Số lượng HC, số lượng BC, số lượng tế bào CD34  trước và sau ly tâm.

III. KẾT QUẢ

2. Ứng dụng quy tình ly tâm đã lựa chọn

Sau khi xác định được tốc độ và thời gian ly tâm thích hợp nhất (500g/6′) để loại hồng cầu và tập trung bạch cầu để giảm thể tích bảo quản chúng tôi tiến hành kiểm tra quy trình này với 20 mẫu MCR trong đó có 10 mẫu MCR được đếm số lượng tế bào CD34 trước và sau khi loại hồng cầu, chúng tôi thấy tỷ lệ mất HC, BC, lympho, Mono, BC trung tính, tế bào CD34 trung bình tương ứng là 51,2%; 14,6%; 9,0%; 10,4%; 18,5%, 13,9% (theo thứ tự) (bảng 1).