Nghiên cứu ảnh hưởng của cao quả nhàu (morinda citrifolia) lên số lượng lympho bào t cd4, t cd8 và sự chuyển dạng lympho bào trên chuột nhắt trắng bị gây suy giảm miễn dịch bằng cyclophosphamid (cy)

Cây nhàu (Morinda citrifolia L. Rubiaceae), một trong những dược liệu được nhân dân sử dụng lâu đời  với mục  đích nâng  cao sức  đề kháng  của  cơ thể [3]. Trong các nghiên cứu trước của chúng tôi, trên chuột nhắt trắng cao quả nhàu liều 6 g/kg trên cả hai mô hình gây suy giảm miễn dịch bằng tia xạ  và  CY đều  có  tác  dụng  làm  tăng  cường  khả năng hồi phục các tổn thương trên hệ miễn dịch thông  qua phục  hồi  số  lượng  tế  bào,  chức  năng của  các  lympho bào  B (Tăng  tỷ  lệ  tạo  hoa hồng mẫn  cảm  và  quầng  dung huyết),  chức  năng  của các lympho bào T (Tăng khả năng phản ứng bì với kháng nguyên) [1]. Đặc biệt gần đây nhiều nhà khoa học trên thế giới đã nghiên cứu về quả của cây nhàu trồng ở Hawaii và bước đầu đưa ra nhiều kết  quả nghiên cứu khả quan về tác  dụng chống ung thư, chống  oxy hóa  và kích thích miễn  dịch [6, 7, 8, 9]. Vì vậy,  chúng  tôi  tiến  hành  nghiên cứu đề tài này nhằm mục tiêu:

Đánh giá sâu về ảnh hưởng của cao quả nhàu lên  dưới  nhóm  của  các  lympho  bào  T  CD4, T CD8 và sự chuyển dạng các lympho bào trong môi trường nuôi cấy trên chuột nhắt trắng bị gây suy giảm miễn dịch bằng cyclophosphamid.

I. CHẤT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

1. Chất liệu và đối tượng nghiên cứu

* Thuốc:

– Cao quả nhàu được chiết xuất trong hỗn hợp dung môi cồn ethylic và nước, được cô đặc đến tỷ lệ 1:5 (1 gam cao từ 5 gam dược liệu khô) do Công ty Nacatifoods cung cấp.  Khi sử  dụng,  cao thuốc được pha loãng trong dung môi nước thành các nồng độ khác nhau.

Levamisol dạng bột chuẩn đạt hàm lượng 99% do viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương cung cấp.

* Đối tượng nghiên cứu:

Chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả hai giống, khoẻ mạnh, cân nặng 20 – 22g của viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương. Súc vật được nuôi dưỡng trong điều kiện chuẩn phòng thí nghiệm của bộ môn Dược lý.

2. Phương pháp nghiên cứu

Chuột nhắt trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô: Lô1: chứng sinh học: không tác động gì, hàng ngày uống nước cất 0,2ml/10g chuột.

Lô2: mô hình: tiêm CY màng bụng liều 200 mg/kg + uống nước cất hàng ngày 0,2ml/10g.

Lô3:  chứng  dương: tiêm  CY màng  bụng  liều

200  mg/kg  +  uống   levamisol  hàng   ngày   liều 100mg/kg.

Lô 4: thuốc thử: tiêm CY màng bụng liều 200 mg/kg + uống cao quả nhàu hàng ngày liều 6 g/kg.

Các  lô  chuột  sau khi được  tiêm  CY và  được uống thuốc hoặc nước cất liên tục trong 5 ngày, ngày thứ 6 giết chuột, lấy máu động mạnh cảnh, bóc tách lấy tổ chức lách để lầm các xét nghiệm.

* Các thông số nghiên cứu:

– Mức độ chuyển dạng các lympho bào

– Xác  định số  lượng  lympho bào  T CD4  và T CD8 bằng phương pháp huỳnh quang.

* Tách tế bào lách từ tổ chức lách

Phá hồng cầu khỏi hỗn dịch tế bào lách bằng dung dịch NH4Cl 0,83%. Rửa ba lần hỗn dịch tế bào lách bằng Hanks. Đếm tế bào lách. Nuôi cấy tế bào  1 x 106  tế bào/ 1ml môi  trường  nuôi  cấy. Môi trường nuôi cấy là F2 + 10% FCS (Fetal Calf Sera). Thêm vào môi trường nuôi cấy đó có tế bào 3 µl PHA/1ml môi trường nuôi cấy. Ủ ở 370C trong 48giờ, ly tâm bỏ dịch nổi, lấy cặn tế bào kéo tiêu bản

Mục tiêu: nghiên cứu ảnh hưởng của cao mềm quả nhàu lên sự chuyển dạng lympho bào và số lượng lym- pho bào T CD4, T CD8 trong máu ngoại vi và trong tổ chức lách trên chuột nhắt thực nghiệm. Phương pháp nghiên cứu: cao quả nhàu tỷ lệ 1:5 (1 g cao chứa 5 gam dược liệu) cho chuột nhắt uống liều 6g/kg thể trọng, liên tục 5 ngày sau khi bị tiêm màng bụng CY liều 200 mg/kg. Lấy máu động mạch cảnh, lách để nuôi cấy đánh giá và xác định sự chuyển dạng lympho bào bằng phương pháp nhuộm giemsa, số lượng lympho bào T CD4, T CD8 bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang. Kết quả: cao quả nhàu làm tăng khả năng chuyển dạng lympho bào, tăng số lượng lympho bào T CD4, T CD8 trong cả máu ngoại vi và tổ chức lách. Kết luận: cao quả nhàu liều 6g/ kg có tác dụng kích thích miễn dịch thông qua làm tăng tỷ lệ chuyển dạng lympho bào, tăng số lượng lympho bào T CD4, T CD8 trên chuột nhắt trắng bị gây suy giảm miễn dịch bằng CY.