Nghiên cứu Hoàn chỉnh kỹ thuật phát hiện và phân tích nhiễm sắc thể ở tế bào tua rau

Sinh thiết tua rau (STTR, chorionic villus sam- pling) là phương pháp  lấy mẫu  tua rau thai để chẩn đoán  trước sinh nhằm phát hiện tình trạng thai nhi trước  khi trẻ ra đời. Trong nhiều tr-ờng  hợp, các bệnh tật di truyền phát hiện từ giai đoạn phôi thai còn giúp cho việc điều  trị sớm để đảm bảo tình trạng sức khỏe tốt nhất  cho trẻ. Các phương pháp th-ờng dùng để chẩn  đoán di truyền tr-ớc sinh nh- STTR, chọc dò dịch ối, rửa tế bμo buồng tử cung… Trong đó, STTR có nhiều ưu điểm  như: Cho kết quả chẩn đoán sớm vμo 3 tháng đầu của quá trình mang thai. Từ tế bμo tua rau lμm đ-ợc tiêu  bản  NST bằng cả hai ph-ơng pháp  trực tiếp vμ nuôi cấy nên lμm tăng độ chính xác của chẩn  đoán (trên 97%) [1]. Tuy nhiên, ở Việt Nam vẫn ch-a có một quy trình nuôi cấy hoμn chỉnh tế bμo tua rau để phân tích NST. Vì vậy, nghiên cứu nμy nhằm hai mục tiêu:
II.    Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
1.    Đối tượng nghiên cứu
Phụ nữ mang thai ở tuần thứ  8 -12 có nhu cầu nạo thai kế hoạch.
2.    Phương pháp nghiên cứu
    C¸ch tiến hỡnh nghiên cứu
D-ới kính  hiển vi soi ng-ợc, tách những tế bμo mμng rụng của mẹ ra khỏi tua rau, rửa sạch tế bμo máu bằng dung dịch Hanks để tránh  nhiễm tế bμo mẹ. Mỗi mẫu  tua rau đ-ợc chia lμm 2 phần để lμm tiêu bản NST bằng 2 ph-ơng pháp  trực tiếp vμ nuôi cấy.
♣ Trong ph-ơng pháp nuôi cấy,  mỗi mẫu  đ-ợc nuôi cấy theo 3 ph-ơng pháp:
+ Ph-ơng pháp 1: Nuôi cấy bằng ph-ơng pháp cắt mảnh tua rau trong môi tr-ờng Amniomax (gọi tắt lμ ph-ơng pháp cắt mảnh+Am.).
+ Ph-ơng pháp 2: Nuôi cấy bằng ph-ơng pháp cắt mảnh tua rau trong môi tr-ờng MEM (gọi tắt lμ ph-ơng pháp cắt mảnh+MEM).
+ Ph-ơng pháp 3: Nuôi cấy bằng ph-ơng pháp tách tế bμo bằng trypsin trong môi tr-ờng Amniomax (gọi tắt lμ ph-ơng pháp trypsin+Am).
Các chai nuôi cấy đ-ợc đặt ở tủ ấm 37oC, nồng độ CO2 5%. Thay môi tr-ờng lần đầu khi tế bμo bắt đầu bám (khoảng ngμy thứ 4 đến 6 kể từ ngμy nuôi cấy đầu tiên). Cấy  truyền đ-ợc thực hiện khi tế bμo mọc dμy nh-ng không đều hoặc ít kỳ giữa. Thời gian thu hoạch đ-ợc tính  từ ngμy đầu tiên nuôi cấy đến ngμy thu hoạch. NST đ-ợc thu hoạch khi các tế bμo mọc đều, phủ kín đáy chai nuôi cấy [  Hình 2.1].
Sinh thiết tua rau dùng để chẩn đoán tr-ớc sinh các bất th-ờng nhiễm sắc thể của thai trong 3 tháng đầu của thời kì mang thai. Mục tiêu: 1. Hoỡn chỉnh kỹ thuật phát hiện nhiễm sắc thể từ tế bỡo tua rau.
2.    Phân tích nhiễm sắc thể ở tế bỡo tua rau. Đối t-ợng vỡ ph-ơng pháp: Tua rau của các thai nạo kế hoạch từ 8-12 tuần ở các Trung tâm Sản khoa. Tính thời gian thu hoạch của: ph-ơng pháp trực tiếp vỡ ph-ơng pháp nuôi cấy; ph-ơng pháp cắt mảnh vỡ ph-ơng pháp trypsin trong 2 loại môi tr-ờng nuôi cấy Amniomax vỡ MEM, từ đó phân tích NST. Kết quả: thời gian thu hoạch của ph-ơng  pháp  trực tiếp, ph-ơng pháp nuôi cấy bằng cắt mảnh trong môi tr-ờng MEM vỡ Amniomax t-ơng ứng lỡ 1, 9 vỡ 16 ngỡy. Trong 31 mẫu phân tích NST, 1 mẫu có đột biến mới trong quá trình nuôi cấy, 3 mẫu có tỷ lệ đa bội cao, không có hiện t-ợng nhiễm tế bỡo mẹ. Kết luận: Ph-ơng pháp cắt mảnh trong môi tr-ờng Amniomax cho thời gian thu hoạch nhanh nhất trong các ph-ơng pháp nuôi cấy (Mo = 9, X = 12 ngỡy). Phân tích NST từ tế bỡo tua rau có thể phát hiện bất th-ờng cấu trúc vỡ số l-ợng NST của thai nhi trong 3 tháng đầu thai kì.