Nghiên cứu một số điều kiện tối ưu trong biểu hiện proinsulin người tái tổ hợp ở hệ e.coli- bl21(de3) với vector pet – 28a(+)

Nghiên cứu này dựa trên việc thiết kế thành công vector biểu hiện pET- 28a(+) có chứa gen mã hoá proinsulin tái tổ hợp. Mục tiêu:biểu hiện gen mã hoá proinsulin người và tìm hiểu một số điều kiện tối ưu trong biểu hiện proinsulin. Phương pháp nghiên cứu:tìm điều kiện tối ưu về mật độ tế bào ban đầu, nhiệt độ nuôi cấy, nồng độ IPTG, thời gian biểu hiện trongbiểu hiện proinsulin. Sản phẩm của biểu hiện nàyđược kiểm chứng bằng điện di biến tính trên gel polyacrylamid (SDS- PAGE) và xác nhận lại bằng Western blot với kháng thể kháng His- Tag. Kết quả:đã chứng minh được sự biểu hiện gen proinsulin bằng phương pháp SDS- PAGE và Western blot; Tìm được bốn điều kiện tối ưu trong biểu hiện proinsulin. Kết luận:điều kiện tối ưu trong biểu hiện proinsulin: mật độ tế bào ban đầu OD6000,6- 1,0; nhiệt độ nuôi cấy 300C; nồng độ IPTG là 0,4 mM; thời gian nuôi cấy 20 giờ.

Trên thế giới, hàng năm có thêm hàng triệu người mắc bệnh đái tháo đường (ĐTĐ). Ở Việt Nam, tỷ lệ mắc bệnh cũng gia tăng hàng năm theo sự phát triển của đời sống kinh tế, sự gia tăng
dân số, tuổi thọ và sự thay đổi lối sống. Đáng lưu ý là nước ta chưa sản xuất được insulin nên phải nhập ngoại toàn bộ, giá thành rất cao; đòi hỏi phải đặt ra những vấn đề nghiên cứu để có thể tiếp cận với công nghệ và nghiên cứu sản xuất insulin trong tương lai. Insulin là một hormon, bản chất là protein, do các tế bào ßcủa tiểu đảo Langerhans tuyến tụy tiết ra, có vai trò quan trọng trong chuyển hoá đường glucose máu người và động vật. Tiền chất của insulin là proinsulin, với đoạn peptid C liên kết chuỗi peptid A và chuỗi peptid B. Dựa theo con đường tự nhiên, người ta đã sản xuất insulin thông qua sản xuất proinsulin tái tổ hợp, sau đó dùng enzym đặc hiệu cắt đoạn peptid C, tạo insulin có hoạt tính. Như vậy, nghiên cứu tạo được proinsulin sẽ là tiền đề cho nghiên cứu sản xuất insulin tái tổ hợp.
Với mong muốn góp phần nghiên cứu sản xuất insulin tái tổ hợp dùng làm thuốc điều trị ĐTĐ, dựa trên việc thiết kế thành công vector biểu hiện pET – 28a(+) có chứa gen mã hoá proinsulin người tái tổ hợp, chúng tôi tiến hành nghiên cứu này với mục tiêu:
Biểu hiện gen mã hoá proinsulin người và tìm hiểu một số điều kiện tối ưu trong biểu hiện protein này