Phát triển kỹ thuật Realtime RT – PCR phát hiện và xác định kiểu gen GI và GIII của vi rút niêm não Nhật Bản

Phát triển kỹ thuật Realtime RT – PCR phát hiện và xác định kiểu gen GI và GIII của vi rút niêm não Nhật Bản
Tác giả: Đỗ Phương Loan, Bùi Minh Trang, Phan Thị Ngà
Tóm tắt:
Nghiên cứu này được thực hiện nhằm mục đích thiết kế cặp mồi đặc hiệu với genotype vi rút VNNB genotype 1 (GI) và genotype3 (GIII) để ứng dụng cho kỹ thuật Realtime RT-PCR phát hiện và xác định GI và GIII của vi rút VNNB từ mẫu bệnh phẩm lâm sàng. Kết quả nghiên cứu cho thấy, bộ mồi thiết kế có độ đặc hiệu cao, xác định chính xác kiểu gen của các chủng vi rút VNNB cho kỹ thuật Realtime RT-PCR, đối với mẫu kiểm tra ngưỡng phát hiện là 1,5 PFU và 3,0 PFU với kiểu gen GI và GIII tương ứng. Ứng dụng kỹ thuật này để kiểm tra 43 mẫu dịch não tủy của bệnh nhân có chẩn đoán lâm sàng nghi ngờ viêm não do vi rút đã phát hiện được 7 mẫu dương tính bao gồm có 3 mẫu dương tính là vi rút VNNB GI và 4 mẫu dương tính là vi rút VNNB GIII. Chọn 02 mẫu được xác định là GI và GIII có giá trị chu kỳ ngưỡng thấp để phân lập vi rút trên tế bào C6/36, phân lập dương tính được khẳng định là vi rút VNNB bằng kỹ thuật RT-PCR. Kết quả nghiên cứu này cho thấy có thể ứng dụng kỹ thuật Realtime RT-PCR này để sàng lọc mẫu, định hướng cho phân lập vi rút, tiết kiệm được thời gian và kinh phí