QUY TRÌNH ĐỊNH TÝP GEN CagAVÀ VacA CỦA Helicobacter pylori BẰNG PHƯƠNG PHÁP MULTIPLEX POLYMERASE CHAIN REACTION
Chúng tôi xây dựng quy trình phát hiện và định týp gen cagA và vacAcủa vi khuẩn Helicobacter pylori(H. pylori) trong bệnh phẩm dựa trên kỹ thuật multiplex PCR. Quy trình được xây dựng bao gồm các bước kiểm tra mẫu, phát triển phương pháp tách chiết DNA, tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR và xác định độ nhạy của phản ứng. Tiếp theo, quy trình được kiểm tra trên một số mẫu sinh thiết dạ dày của bệnh nhân ung thư và viêm dạ dày. Kết quảcho thấy quy trình có khả năng phát hiện và định týp chính xác gen cagAvà vacA của vi khuẩn H. pylori một cách nhanh chóng và đơn giản. Quy trình đã được xây dựng thành công, có khả năng phát triển thành một phương pháp chẩn đoán nhanh, chính xác và có thể được sử dụng như một công cụ nghiên cứu dịch tễ học sự nhiễm H. pylori, và tìm hiểu mối liên quan giữa các týp gene cagA và vacAvới các biểu hiện lâm sàng ở bệnh nhân ung thư và viêm dạ dày.
Helicobacter pylori (H. pylori),xoắn khuẩn Gram âm có trong dạdày người, được chứng minh là có liên quan đến các bệnh về dạ dày-tá tràng và ung thư dạ dày (7). Các chủng H. pylorikhác nhau có thể có độc tính khác nhau trong quá trình gây bệnh trên người (2). Nhiều gen của H. pylori ñược chọn để phát hiện sự hiện diện của vi khuẩn này trong bệnh phẩm (urease, rRNA 16S, gen bám-adhesion gene…). Trong nghiên cứu này, chúng tôi quan tâm đến hai gen cagA (cytotoxin-associated gene) và vacA (vacuolating toxin gene) vì sản phẩm của chúng ñược coi là hai yếu tố ñộc lực chủyếu có khả năng gây bệnh và đặc trưng của vi khuẩn H. pylori (1, 4).Sự kết hợp các týp gen khác nhau giữa hai gen này có thể liên quan đến biểu hiện lâm sàng khác nhau ở người bệnh. Gen cagA có thể không có ở tất cả các chủng H. pyori. Sự hiện diện của gen cagA ở một chủng nào đó thường có liên quan đến những hậu quả lâm sàng nghiêm
trọng cho người bị nhiễm (3). Protein cagA, có kích thước từ128 ñến 140 kDa, có khả năng kích thích phản ứng phosphoryl hóa tyrosine trong tế bào ký chủ, dẫn đến sự tăng sinh bất thường của các tế bào biểu mô dạdày (9).Trong khi đó, gen vacA có mặt ởtất cảcác chủng H. pylori, cảm ứng hình thành không bào. Cấu trúc gen này chứa ít nhất hai vùng biến đổi gồm vùng “tín hiệu” và vùng “giữa”.
Hy vọng sẽ giúp ích cho các bạn, cũng như mở ra con đường nghiên cứu, tiếp cận được luồng thông tin hữu ích và chính xác nhất