Tách chiết, phân tích Aflatoxin trong thực phẩm và dược liệu bằng cột sắc ký ái lực miễn dịch kết hợp sắc ký lỏng hiệu năng cao

TRÍCH YẾU LUẬN ÁN

1. Tóm tắt mở đầu:

Tên tác giả: Nguyễn Thị Nguyệt Thu

Tên luận án: “Tách chiết, phân tích Aflatoxin trong thực phẩm và dược liệu bằng cột sắc ký ái lực miễn dịch kết hợp sắc ký lỏng hiệu năng cao”

Ngành khoa học của luận án: Kiểm nghiệm thuốc.  Mã số: 62.73.15.01

Tên cơ sở đào tạo: Trường Đại học Dược Hà Nội

2. Nội dung bản trích yếu

2.1 Mục tiêu và đối tượng nghiên cứu của luận án

Mục tiêu:

-Nghiên cứu chế tạo cột sắc ký ái lực cho aflatoxin 

-Đánh giá khả năng phân tích aflatoxin trên mẫu thực phẩm và dược liệu bằng phương pháp làm sạch mẫu với cột sắc ký ái lực miễn dịch và định lượng aflatoxin bằng sắc ký lỏng cao áp với đầu dò huỳnh quang.  

Đối tượng:

         AFB1, AFB2, AFG1, AFG2 , kháng thể thỏ kháng AFB1 tự chế tạo, cột sắc ký ái lực tự chế tạo (cột IAC-Pasteur), cột sắc ký ái lực đối chứng (Vicam-USA), cột chiết xuất pha rắn SPE C18  Chromabond (Macherey-Nagel), các mẫu thực phẩm và dược liệu.

2.2. Các phương pháp nghiên cứu đã sử dụng:

         Áp dụng các phương pháp miễn dịch học, chiết xuất pha rắn và HPLC

2.3. Các kết quả chính và kết luận:

2.3.1. Nghiên cứu chế tạo cột sắc ký ái lực cho aflatoxin:

Từ kháng thể thỏ thu được trên thực nghiệm, chúng tôi đã chế tạo được cột IAC-Pasteur có dung lượng 100 ng đối với AFB1, AFB2, AFG1 và  >50 ng đối với AFG2. Cho mẫu thử qua cột và phân tích aflatoxin bằng phương pháp HPLC với đầu dò huỳnh quang cho thấy giới hạn phát hiện của phương pháp phân tích khoảng 0,15 ppb và giới hạn định lượng là  1ppb. Hiệu suất thu hồi của aflatoxin tổng số tại hàm lượng thấp 5,2 ppb là >90%. Khả năng bắt AFB1 của cột vẫn ổn định sau 2 năm. Các thông số này phù hợp với yêu cầu kiểm tra aflatoxin trên thực phẩm và dược liệu. 

2.3.2. Đánh giá khả năng phân tích aflatoxin trên mẫu thực phẩm và dược liệu bằng phương pháp làm sạch mẫu với cột sắc ký ái lực miễn dịch và định lượng aflatoxin bằng sắc ký lỏng cao áp với đầu dò huỳnh quang: 

Quá trình làm sạch qua cột IAC giảm hầu hết các pic tạp chất gây nhiễu. Hiệu suất thu hồi của aflatoxin tổng số trên nền mẫu thực phẩm và dược liệu trong khoảng nồng độ từ 2,6 -20,8 ppb dao động trong khoảng 76-117% với LOD > 0,3 ppb và LOQ  1ppb.  Khả năng làm sạch mẫu của cột IAC-Pasteur được đánh giá bằng cách so sánh với 2 loại cột làm sạch thông dụng khác là cột SPE C18 và cột IAC Vicam. Kết quả cho thấy cột IAC-Pasteur tương đương với cột IAC Vicam về độ chọn lọc cũng như kết quả định lượng. Ngòai ra, dùng cột SPE C18 có thể cho kết quả dương tính giả trên một số nền mẫu, hiện tượng này không gặp khi xử lý mẫu bằng cột IAC. Kiểm tra aflatoxin trên 74 mẫu thực phẩm, nông sản và 54 mẫu dược liệu, thuốc đông dược cho thấy phương pháp kiểm tra aflatoxin của chúng tôi có khả năng phát hiện aflatoxin tại các hàm lượng rất thấp. 

Kết quả cho thấy cột IAC do chúng tôi sản xuất hoàn toàn thích hợp cho mục đích chiết và làm giàu aflatoxin trong mẫu thực phẩm và dược liệu.