TẠO KHÁNG THỂ ĐA DÒNG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH ELISA PHÁT HIỆN ĐỘC TỐ RUỘT NHÓM A
TẠO KHÁNG THỂ ĐA DÒNG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH ELISA PHÁT HIỆN ĐỘC TỐ RUỘT NHÓM A CỦA STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Nguyễn Đỗ Phúc
và Cs
TÓM TẮT
Đặt vấn đề: Ngộ độc thực phẩm hiện nay liên quan nhiều rất sự ônhiễm Staphylococcus aureus và độc tố của chúng gây ra trong những năm gần đây. Do đó thiết lập qui trình ELISA để phát hiện độc tốlà một nhu cầu cần thiết hiện nay.
Mục tiêu nghiên cứu: Tạo kháng thể đa dòng và khảo sát các thông số kỹ thuật của qui trình ELISA sandwich xây dựng bộ kít phát hiện độc tố ruột nhómA của Staphylococcus aureus.
Phương pháp nghiên cứu:Sử dụng các kỹ thuật gây miễn dịch trên thỏ thu nhận kháng thể, kỹ thuật tinh chế kháng thể và cộng hợp kháng thể để làm nguyên vật liệu cho nghiên cứu qui trình kỹ thuật ELISA sandwich phát hiện độc tố ruột nhóm A của Staphylococcus aureus.
Kết quả nghiên cứu:Kháng thể sau khi gây miễn dịch trên thỏ được tinhchế và thu được 700µl, với nồng độ 16860 µg/ml. Kháng thể này được cộng hợp với enzym HRP, vàsử dụng để thực hiện quy trình ELISA sandwich với độ pha loãng là 3.200 lần trong PBS buffer. Các thông số của qui trình ELISA sandwich đốivới độc tố ruột nhóm A là: – Quá trình phủ giếng + Dung dịch phủ giếng là Carbonate buffer pH 9,5. + Nồng độ kháng thể kháng độc tố A phủ giếng là 5 µg/ ml. + Ủ ở nhiệt độ phòng trong 3 giờ. – Quá trình khóa giếng. + Khóa giếng bằng sữa gầy 1%. + Ủ ở 4oC trong 30 phút. – Quá trình ủ với độc tố + Độc tố được pha loãng trong PBS buffer. + Ủ ở 37oC trong 2 giờ. – Quá trình ủ với kháng thể thứ cấp.+ Kháng thể đánh dấu HRP được pha loãng 1/3.200 trong PBS buffer. + Ủ ở 25oC trong 1 giờ. – Đọc kết quả: Đọc kết quả bằng dungdịch phát màu 2,2’-azino-di (3-ethyl-benzonthiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) ở bước sóng 405nm. – Đánh giá các thông số kỹ thuật củaphương pháp mới so với phương pháp tham chiếu với kết quả: độ nhạy 100%, độ đặc hiệu 93%, tỷ lệ âm tính giả 0%, tỷ lệ dương tính giả 6,25% và độ tương đồng củathử nghiệm là 95,5%
Kết luận: Bộ kit có thể dùng để phát hiện độc tố ruột nhóm A của Staphylococcus aureus..
Hy vọng sẽ giúp ích cho các bạn, cũng như mở ra con đường nghiên cứu, tiếp cận được luồng thông tin hữu ích và chính xác nhất