TỐI ƯU MULTIPLEX – PCR PHÁT HIỆN VI KHUẨN CHLAMYDIA TRACHOMATIS

Nghiên cứu được tiến hành nhằm tối ưu multiplex PCR phát hiện nhanh và chinh xác vi khuẩn Chlamy¬dia trachomatis. Các mẫu bệnh được khảo sát là của các bệnh nhân tới khám chữa bệnh tại bệnh viện Phụ sản Bắc Giang từ tháng 3 đến tháng 6 năm 2011. Điều kiện tối ưu của phản ứng PCR nhằm phát hiện các đoạn DNA đặc thù của Chlamydia trachomatis bằng 5 cặp mồi CtP, CtM, CtR, NO, Chlamp và cặp mồi đối chứng ơưcmg AR, đã được khảo sát và cho tháy nhiệt độ gắn mồi tối ưu của từng cặp mồi nằm trong khoảng từ 53°c đến 57°c. Đồng thời, điều kiện tối ưu cho phản ứng Multiplex PCR với 4 cặp mồi: CtP, NO, Chlamp và AR đã được xác định là 56°c. Két quả khảo sát tỷ lệ nhiễm bệnh ở các bệnh nhân đến khám phụ khoa ở bệnh viện Phụ sản Bắc Giang cho thấy có 31 mẫu dương tính trong số 251 mẫu nghiên cứu, chiếm 12,35%.

Bệnh nhiễm khuẩn đường sinh dục do vi khuẩn Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) là bệnh phổ biến trên toàn Thế giới và có mức độ lây nhiễm cao. Theo Tổ chức Y tế Thế giới, mỗi năm có khoảng 90 triệu người mắc bệnh do nhiễm vi khuẩn này. Nhiễm c. trachomatis là nguyên nhân gây viêm vùng chậu, với khoảng 80% nữ giới và 70% nam giới nhiễm c. trachomatis không biểu hiện triệu chứng, đây là nguyên nhân bệnh lây bệnh ra cộng đồng [1], Vi khuẩn c. trachomatis là vi khuẩn kí sinh nội bào, bệnh ít biểu hiện ra bên ngoài nên cần có biện pháp phát hiện nhanh vi khuẩn để có biện pháp chữa kịp thời tránh gây biến chứng cho các bệnh nhân. Việc sử dụng các cặp mồi đã nghiên cứu và công bố trên thế giới để phát triển thành kít phát hiện vi khuẩn c. trachomatis ở các bệnh nhân là phương pháp có độ chính xác cao. Ratti và cộng sự (1991) dùng cặp mồi Chlamp để xác định vi khuẩn c. trachomatis [2], Năm 1993, Roosendaal và cộng sự đã so sánh độ nhạy của phương pháp chuẩn đoán bằng PCR, sử dụng 4 cặp mồi AR, CtM, CtR, CtP để xác định vi khuẩn C.trachomatis [3]. Đến năm 2006, Viroj cùng các cộng sự đã dùng cặp mồi NLO để xác định các mẫu bệnh [1], Mục tiêu nghiên cứu nhằm khảo nghiệm, tối ưu hóa việc ứng dụng các cặp mồi đã công bố để phát hiện vi khuẩn c. trachomatis bằng phương pháp PCR; phát triển phương pháp multiplex PCR phát hiện vi khuẩn c. trachomatis và xác định tỷ lệ nhiễm c. trachomatis tại Bắc Giang bằng phương pháp multiplex PCR.