2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Đối tượng:
Cây Bùm bụp được thu hái tại Tam Đảo, Vĩnh Phúc. Mẫu lá của cây được rửa sạch, phơi khô trong bóng râm, sau đó sấy khô bằng tủ sấy ở nhiệt độ500C, sau đó đem nghiền thành bột. Bột lá khô được đem chiết trong dung môi Metanol.
Dịch chiết Metanol này là đối tượng dùng để nghiên cứu.
2.2. Phương pháp nghiên cứu:
s Phương pháp sắc kỷ dùng phân lập các hợp chất bao gồm:
– Sắc ký lớp mỏng TLC: được tiến hành trên bản mỏng tráng sẵn Silicagel trên đế nhôm hay thủy tinh. TLC được sử dụng để kiểm tra và định hướng cho sắc ký cột thậm chí TLC điều chế còn dùng để thu chất trực tiếp
– Sắc ký cột CC: Dùng để tách chất sau khi đã lựa chọn được dung môi thích hợp từ
TLC. Chất hấp phụ là pha tĩnh gồm Silicagel dạng bột và được nhồi vào cột (thủy tinh). Chất cần tách sẽ được đưa lên cột. Việc đưa chất lên cột tách là rất quan trọng phụ thuộc vào lượng chất và dạng chất. Có thể đưa ở dạng tẩm bột (nhồi khô) hoặc trực tiếp đưa chất lên sau khi hòa tan chất trong dung môi thích hợp (nhồi ướt). Sau khi
nhồi tiến hành cho chạy cột bằng cách cho hệ dung môi đã chọn chảy và hứng lấy chất.
s Phương pháp xác định cấu trúc hóa học các hợp chất [5]:
– Phương pháp khổ khối lượng (MS): Nguyên tắc chủ yếu là dựa vào sự phân mảnh ion
của phân tử chất dưới sự bắn phá của chùm ion bên ngoài. Phổ MS ngoài cho các mảnh ion phân tử còn cho các mảnh ion khác dựa mà dựa vào đó có thể xác định được cơ chế phân mảnh và dựng lại được cấu trúc hợp chất. Vì vậy phổ khối lượng sẽ rất hữu hiệu trong việc xác định cấu trúc khi kết hợp với các phổ khác.
– Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): Nguyên lý chung là sự cộng hưởng khác nhau của các hạt nhân từ ( H, 13C) dưới tác dụng của từ trường ngoài. Sự cộng hưởng khác nhau này được biểu diễn bằng độ dịch chuyển hóa học.
Phổ 1H xác định độ dịch chuyển hóa học của các nguyên tử H xác định trong khoảng từ 0ppm đến 14 ppm tùy mức độ lai hóa của nguyên tử cũng như đặc trưng riêng của từng phân tử.
Phổ 13C cho tín hiệu vạch phổ của C. Thang phổ C từ 0 ppm đến 240 ppm. Tín hiệu trên phổ này xác định được bậc của từng C trong phân tử.
Các phổ tương tác hai chiều cho phép xác định các tương tác của hạt nhân từ của phân tử trong không gian 2 chiều.
Sự kết hợp đồng bộ giữa các phổ NMR giúp cho việc xác định cấu trúc hóa học được chính xác.
s Phương pháp thử hoạt tính sinh học gây độc tế bào: Phương pháp của Likhitwitayawuid [6] trên 2 dòng tế bào ung thư người là tế bào ung thư màng tim người và tế bào ung thư gan người. Tế bào được nuôi cấy trong điều kiện tiêu chuẩn và được thử nghiệm với các mẫu đã chuẩn bị sẵn ở các nồng độ khác nhau trên phiến vi