Xây dựng kỹ thuật Multiplex-pcr hiện trực tiếp gen độc tố của Bacillus cereus ở thực phẩm gây nhiễm thực nghiệm

Ngộ độc thực phạm gậy tiễu chạy do Bacillus cerễus (B. cerễus) lạ dộ tạc động cuạ bạ loại độc tộ’ ruột bạo gộm độc tộ’ ly giại hộng cầu (Hbl), không ly giại hộng cầu (Nhễ) độc tộ’ ruột (BcễT). Mục tiêu: (1) Xạy dưng ky thuạt Multiplễx – PCR đễ phát hiện trực tiếp cạc gễn độc tộ’ gạy tiễu chạy cuạ chung B. cễrễus chuẩn ATCC4342, (2) ứng dung ky thuật Multiplễx – PCR phạt hiện cạc gễn nạy cuạ B. cễrễus trễn thực phạm gạy nhiễm thực nghiễm. Đối tượng va phương pháp nghiên cứu: Chung chuắn quốc tế B. cễrễus ATCC4342, cạp moi bcễT, nhễA, hblA vạ hblD , thực phạm sạch được sư dung đễ xạy dưng ky thuật Multi­plex – PCR.

Kết quá: Giới hạn phạt hiện gễn độc tộ’ cuạ ky thuạt Multiplễx – PCR trong nghiên cưu lạ 103vk/ ml thực phạm gạy nhiễm thực nghiễm, giơi hạn phạt hiện nạy cạộ hơn khi so vơi kết quạ cuạ Jạckson vạ CS lạ 4x103vk/ml thực phạm. Kết luán: (1) Đã xạy dưng thạnh cộng ky thuạt Multiplễx – PCR đễ phạt hiện trực tiếp gễn độc tộ’ cuạ B. cệrệus, (2) sư dung ky thuạt Multiplễx PCR đạ phạt hiện được cạc gễn độc tộ’ cuạ B. cệrệus trện thực phạm gây nhiễm thực nghiệm

Ngáy nay B. cereus đựợc biệt đên lá một trong nhựng cẩn nguyện quan trong gáy rá các vu ngộ độc thực án. Ngộ độc thực phám do B. cereus đựợc chiá rá lám hái dáng chính lá gáy tiêu cháy vá non. Dáng ngộ độc thực phám gáy tiêu cháy lá do tác động cuá bá lộái độc tộ’ ruột (ệntệrotoxin) báộ gom độc tộ’ ly giái hong cáu Hbl (má hộá bôi bôi 3 gện nhệA, nhệB, vá nhệC), độc tộ’ ruột khong ly giái hong cáu (Nhệ má hộá bôi gện hblA, hblC vá hblD) vá độc tộ’ ruột T (BcệT) cuá B. cereus gáy rá. Đáy lá các độc tộ’ ruột chịu nhiệt gáy đáu bung vá tiệu cháy, các triệu chựng náy thựỢng xuất hiện sáu 8 – 16 giô sáu khi án phái thực án bị ộ nhiệm vôi B. cereus, khi độ các tệ’ báo sinh dựông phát triển vá giái phong độc [1, 5].

Việc ựng dung các phựông pháp truyện thong đế chán đoán ngộ độc thực phám do B. cereus lá phán láp vá pháthiện rá các chung tộ’ ruột chu yệu dựá váo các ky thuật sinh hộc vá miện dịch đệ phát hiện khá náng sinh độc tộ’ cuá các chung B. cereus. Tuy nhiện, phựông pháp nuoi cáy, phán láp vá thực hiện các thự nghiệm vệ khá náng sinh độc độc tộ’ cuá các chung B. cereus thựông đát, ton nhiều thôi gián vá cong sực, do váy việc phát triện các phựông pháp phát hiện nhánh B. cereus trong thực phám sệ đong một vái trộ rát quán trong trong việc giám sát thực phám bị ộ nhiệm cung nhự ựng dung đệ chán đoán nhánh các vu ngộ độc thực phám cán nguyện do lộái vi khuán náy [6].

Việc ựng dung các đoán gện moi vá ky thuát PCR đá cho phệp chung tá phát triện nhiệu ky thuát sinh hộc phán tự đệ phát hiện các tác nhán gáy bệnh do vi khuán một cách nhánh chong má khong cán phái sự dung các phựông pháp nuoi cếy truyện thong. Trong thực phám nhiệu ky thuát sinh hộc phán tự đá đựôc ựng dung đệ nghiện cựu vá p h át hiện các tác nhán gáy ộ nhiệm do các loại vi khuân khác nhau bao gom cả B. cereus và ky thuật PCR đa được chứng minh la co khá nàng phát hiện nhanh va co gia thanh hợp lý. Để phat hiện được tat ca cac gển độc to’ ruột của B. cereus nểu sứ dung ký thuạt PCR đôn moi để phat hiện tứng gện thì sệ mat nhiểu thôi gian va co gia thanh cao, do vay nhiều tac gia đa xay dứng thanh cong cac ký thuạt PCR đa moi (multiplex – PCR) nham phat hiện đong thôi nhiệu gện đọc to’ mọt cua B. cereus trong thức phâm [2, 6].

Hiện nay ợ Việt Nam, việc phat hiện ra B.cệrệus co mặt trong thức phâm van dựa vao phứông phap nuoi cay truyện thông, ơ trong nghiện cứu nay chung toi sứ dung chung vi khuan B. cereus chuấn ATCC4342 đệ tiện hanh xay dứng ky thuạt PCR đa moi đế phat hiện 4 gện đọc to’ ruot cua B. cereus bao gom gện đọc to’ ruọt khong ly giai hong cau (nhệA), gện đọc to’ ruot ly giai hong cau (hblD va hblA), gện đọc to’ ruot T (bcệT) trện quy mo phong thí nghiệm đẩ tứ đo co thẩ ap dung ky thuạt nay đẩ phat hiện cac gện đọc to’ gay tiệu chay trong mot so’ san phâm thức pham tại Việt Nam