Xây dựng kỹ thuật multiplex – pcr phát hiện trực tiếp gen độc tố của bacillus cereus ở thực phẩm gây nhiễm thực nghiệm

Ngộ độc thực phẩm gây tiêu chảy do Bacillus cereus (B. cereus) là do tác động của ba loại độc tố ruột bao gồm độc tố ly giải hồng cầu (Hbl), không ly giải hồng cầu (Nhe) độc tố ruột (BceT).  Mục tiêu:  (1) Xây dựng kỹ thuật Multiplex  –  PCR để phát hiện trực tiếp các gen độc tố gây tiêu chảy của chủng B. cereus chuẩn ATCC4342, (2) Ứng dụng kỹ thuật Multiplex  –  PCR phát hiện các gen này của B. cereus trên thực phẩm  gây  nhiễm  thực  nghiệm.  Đối  tượng  và  phương  pháp  nghiên  cứu:  Chủng  chuẩn  quốc  tế  B.  cereus ATCC4342, cặp mồi bceT, nheA, hblA và hblD , thực phẩm sạch được sử dụng để xây dựng kỹ thuật Multiplex – PCR. Kết quả: Giới hạn phát hiện gen độc tố của kỹ thuật Multiplex – PCR trong nghiên cứu là 103vk/
ml thực phẩm gây nhiễm thực nghiệm, giới hạn phát hiện này cao hơn khi so với kết quả của Jackson và CS là 4x103vk/ml thực phẩm.  Kết luận: (1) Đã xây dựng thành công kỹ thuật Multiplex  –  PCR để phát hiện trực tiếp gen độc tố của B. cereus, (2) Sử dụng kỹ thuật Multiplex PCR đã phát hiện được các gen độc tố của B. cereus trên thực phẩm gây nhiễm thực nghiệm

Ngày  nay  B.  cereus  được  biết  đến  là  một trong  những  căn  nguyên  quan  trọng  gây  ra  các vụ ngộ độc thức ăn. Ngộ độc thực phẩm do B. cereus  được  chia  ra  làm  hai  dạng  chính  là  gây tiêu chảy và nôn. Dạng ngộ độc thực phẩm gây tiêu chảy là do tác động của ba loại độc tố ruột (enterotoxin)  bao  gồm  độc  tố  ly  giải  hồng  cầu Hbl  (mã  hóa  bởi  bởi  3  gen  nheA,  nheB,  và nheC), độc tố ruột không ly giải hồng cầu (Nhe mã hóa bởi gen hblA, hblC và hblD) và độc tố ruột T (BceT) của  B.  cereus  gây ra. Đây là các độc tố ruột chịu nhiệt gây đau bụng và tiêu chảy, các triệu chứng này thường xuất hiện sau 8  –  16 giờ  sau  khi  ăn  phải  thức  ăn  bị  ô  nhiễm  với B.  cereus,  khi  đó  các  tế  bào  sinh  dưỡng  phát triển và giải phóng độc [1, 5]