XÂY DỰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX-PCR SỬ DỤNG CHUNG MỒI ĐỂ PHÁT HIỆN MỘT SỐ TÁC NHÂN GÂY NHIỄM KHUẨN TRONG THỰC PHẨM

XÂY DỰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX-PCR SỬ DỤNG CHUNG MỒI ĐỂ PHÁT HIỆN MỘT SỐ TÁC NHÂN GÂY NHIỄM KHUẨN TRONG THỰC PHẨM

Nguyễn Đỗ Phúc(1), Hoàng Hoài Phương(1), Trần Thị Ngọc Phương(1), Phạm Hùng Vân(2)

TÓM TẮT :

Đặt vấn đề: Kỹ thuật multiplex-PCR cho phát hiện các tác nhân gây nhiễm khuẩn trong thực phẩm như Listeria monocytogenes, Vibrio choleare và Shigella spp. đồng thời cùng một lúc nhằm góp phần cho công tác xét nghiệm nhanh phục vụ cho giám sát và ngộ độc thực phẩm là một nhu cầu cấp thiết hiện nay.

Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng bộ kit xét nghiệm multiplex PCR sử dụng chung mồi để phát hiện đồng thời nhiều tác nhân vi sinh gây nhiễm trùng thực phẩm bao gồm: Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, và Shigella spp. 

Phương pháp nghiên cứu: Các chủng vi khuẩn chuẩn Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, và Shigella spp sau khi tăng sinh trên môi trường TSB được sử dụng để tách chiết DNA và kỹ thuật multiplex-PCR sử dụng chung mồi để phát hiện các tác nhân này. 

Kết quả nghiên cứu: Trong phản ứng multiplex-PCR sử dụng chung mồi có nồng độ Mg2+ là 3,5mM, nồng độ các cặp mồi để phát hiện các vi khuẩn Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, và Shigella spp là 2pM và nồng độ mồi chung là 5pM cho một phản ứng. – Độ nhạy của bộ kít multiplex-PCR chung mồi, khi phát hiện Listeria monocytogene, Vibrio cholerae, và Shigella spp là 103 vi khuẩn/ml. – Độ đặc hiệu của bột kít multiplex-PCR là đặc hiệu với các vi khuẩn đích Listeria monocytogene, Vibrio cholerae, và Shigella spp và không đặc hiệu đối với các vi khuẩn không đích: Listeria innocua, Listeria ivanovii, Listeria seewil, Vibrio parahamolyticus, Salmonella enteritidis, Salmonella typhymurium và E.coli.

Kết luận: Sử dụng phương pháp multiplex-PCR chung mồi để phát hiện 3 vi khuẩn Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, và Shigella spp. gây ô nhiễm thực phẩm cùng một lúc có thể áp dụng tại phòng thử nghiệm vi sinh thực phẩm trong công tác giám sát và điều tra một số vi khuẩn gây tiêu chảy do thực phẩm bi ô nhiễm gây nên.