Xây dựng kỹ thuật xác định hiệu giá ARN vắc xin sởi bằng Real Time RT – PCR

Xây dựng kỹ thuật xác định hiệu giá ARN vắc xin sởi bằng Real Time RT – PCR
Tác giả: Nguyễn Thị Thường, Nguyễn Đăng Hiền, Huỳnh Phương Liên, Nguyễn Trần Hiển, Phạm Thị Bích Ngọc, Trần Thị Hiền
Tóm tắt:
Những tiến bộ nhanh chóng, không ngừng của khoa học vắc-xin và công nghệ phòng thí nghiệm đã cho ra đời các phương pháp kiểm định tương ứng. Tế bào Vero được gây nhiễm vắc-xin chuẩn và thành phẩm của 3 lô vắc xin ở các độ pha loãng 10 lần từ đặc đến 10-4. ARN trong tế bào gây nhiễm được tách chiết ở 24 giờ, 48 giờ, và 72 giờ bằng kít thương mại sau khi đã trypsin hóa hoặc làm tan tế bào bằng dung dịch ly giải nhanh (TpLR) và được gặt trực tiếp chỉ bằng TpLR. Hiệu giá ARN >10-2 ở 24 giờ nằm trong khoảng tuyến tính của gam chuẩn (101 – 106 bản sao), đạt giai đoạn “tạo hình phẳng” và nằm ngoài khoảng tuyến tính sau 48 giờ. ARN gặt bằng TpLR tương quan chặt chẽ, không có sự khác biệt tuyệt đối với tách chiết bằng kít thương mại (R>0.96, p>0,05) và ổn định sau 1 năm ở -80oC. Tính lặp lại của một lần và giữa các lần làm phản ứng tương ứng là 0,8% và 2,2%. Hiệu giá ARN trung vị là 2,62×107 bản sao/ml vắc-xin và lớn hơn PFU 1,83×103 lần. Kỹ thuật mới xác định hiệu giá vắc-xin sởi sống bằng định lượng ARN trong tế bào Vero gây nhiễm ở 24 giờ chỉ với nồng độ đặc và pha loãng vắc-xin 10-1 có nhiều ưu điểm về độ chính xác, thời gian, tính giản tiện, tự động hóa và hiệu quả kinh tế.