Xây dựng phương pháp định lượng serotonin trong huyết tương bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector huỳnh quang

Một phương pháp định lượng Serotonin bằng HPLC với detecor huỳnh quang đã được xây dựng và tham định. Serotonin được chiết bằng phương pháp kết tủa protein với acid pecloric, trong điều kiện sắc kí bao gồm cột C18, 5p,m, 250 x4.6 mm, chương trình pha động đệm acetat – ACN- nước tại bước sóng 285/345 nm và tốc độ dòng 1.5 ml/phút. Kết quả thâm định cho thấy phương pháp có độ lặp lại tốt, cho kết quả tin cậy với phần trăm tìm lại trong khoảng 98,6 – 106,20%. Ngoài ra các tiêu chuan khác của phép tham định phương pháp phân tích trong dịch sinh học cũng đạt yêu cầu. Với LOD và LOQ lần lượt là 0.74 và 2.25 ng/ml, phương pháp trên cung cấp một quá trình phân tích serotonin rất khả thi, có thể áp dụng rộng rãi tại các cở sở điều trị hoặc kiểm nghiệm tại Việt Nam.

Serotonin là một chất dẫn truyền thần kinh có nguồn gốc từ Trytopan, được tìm thấy chủ yếu tại ống tiêu hóa và hệ thống thần kinh trung ương của con người. Đối với hệ thần kinh, serotonin đóng nhiều vai trò khác nhau, trong đó có khả năng ảnh hưởng lên tâm trạng lòng ham muốn, sự co cơ hay trạng thái tỉnh táo của cơ thể. Do đó đối với công tác nâng cao chất lượng chăm sóc sức khỏe tâm thần, việc xác định đượng nồng độ chất này là rất quan trọng. Trong khuôn khổ nghiên cứu, chúng tôi đã đề xuất một phương pháp định lượng Serotonin trong huyết tương chính xác và nhanh chóng, đồng thời tiến hành thẩm định lại phương pháp đó the những hướng dẫn của cơ quan kiểm soát thuốc và thực phẩm quốc gia Hoa Kỳ (FDA).
II.    NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1.    Mẫu thử và mẫu chuẩn
Dung dịch chuẩn gốc: Hòa tan Serotonin chuẩn trong nước để thu được dung dịch có nồng độ chính xác khoảng 250 mg/ml.
Dung dịch chuẩn làm việc: từ dung dịch chẩn gốc pha dung dịch chuẩn làm việc có nồng độ chính xác khoảng 5000 ng/ml.
Dãy dung dịch chuẩn tuyến tính: pha loãng dung dịch chuẩn làm việc với nước để thu được các dung dịch chuẩn có nồng độ Serotonin từ 100 đến 400 ng/ml
Mẫu trắng: mẫu huyết tương lấy từ Viện huyết học truyền máu trung ương.
Mẫu kiểm chứng (QC): Phối hợp một lượng xác định Serotonin chuẩn với huyết tương trắng để có các mẫu tự tạo có nồng độ xác đinh. Mẫu tự tạo dùng trong xây dựng và thẩm định phương pháp phân tích.
2.2.    Thiết bị và hóa chất
Thiết bị phân tích: Hệ thống HPLC WATER, detector huỳnh quang (trung tâm nghiên cứu ứng dụng sinh y dược học, học viện Quân Y).
Dung môi, hóa chất: Acetonitril, đệm Acetat 0.1N (pH 4), acid Pecloric 20%, Acid Ascorbic 3.4M…
Chất chuẩn: Serotonin tinh thể (Đức)
2.3.    Phương pháp nghiên cứu
Thẩm định    phương pháp phân tích với    xác    chỉ    tiêu    dược    quy    định trong    Dược    điển    và
theo hướng dẫn thẩm định phương pháp phân tích của FDA – US