XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG VIRUS VIÊM GAN C (HCV) BẰNG KỸ THUẬT REAL-TIME RT-PCR
XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG VIRUS VIÊM GAN C (HCV) BẰNG KỸ THUẬT REAL-TIME RT-PCR
Nguyễn Hoàng Chương
*
, Hồ Thị Thanh Thủy*, Cao Minh Nga**,
Phạm Hoàng Phiệt
**
, Hồ Huỳnh Thùy Dương
*
TÓM TẮT
Việc định lượng trực tiếp virus viêm gan C (HCV) có vai trò quan trọng trong chẩn đoán, chỉ định, tiên lượng đáp ứng điều trị. Muốn vậy, yêu cầu chủ yếu đối với xét nghiệm là cho phép định lượng virus chính xác với độ nhạy và đặc hiệu cao cũng như khoảng đo rộng. Trong nghiên cứu này chúng tôi trình
bày qui trình xây dựng kỹ thuật Real-time reverse transcription – polymerase chain reaction (real-time RT-PCR) thỏa mãn được các yêu cầu trên.
Hệ primer – probe – amplicon chúng tôi tự xây dựng dựa trên dựa trên dữ liệu cơ bản của HCV và các điều kiện kỹ thuật thích hợp. Tính đặc hiệu được kiểm tra với các mẫu virus và vi khuẩn thường gặp cũng như các đặc điểm hóa lý của sản phẩm PCR.Độ chính xác được so sánh với kỹ thuật HCV-bDNA.
Kết quả: Hệ primer – probe – amplicon của chúng tôi xây dựng có độ đặc hiệu cao, độ nhạy khoảng
2log10bản sao và quãng đo 2log10từ đến 7log10. Hệ số tương quan về kết quả định lượng so sánh với kỹ
thuật HCV-bDNA là r=0,9237 (số mẫu n=12).
Kết luận: Qui trình định lượng HCV bằng kỹ thuật real-time RT-PCR do chúng tôi thiết kế chứng tỏ có độ đặc hiệu và độ nhạy cao, khoảng đo chính xác 6log10và kết quả định lượng có tương quan cao so với kỹ thuật HCV-bDNA
Hy vọng sẽ giúp ích cho các bạn, cũng như mở ra con đường nghiên cứu, tiếp cận được luồng thông tin hữu ích và chính xác nhất